ハイブリドーマ開発
出典: フリー百科事典『ウィキペディア（Wikipedia）』 (2021/11/01 08:15 UTC 版)
「モノクローナル抗体」の記事における「ハイブリドーマ開発」の解説
詳細は「ハイブリドーマ技術（英語版）」を参照 モノクローナル抗体の作製の背後にある研究の多くは、ハイブリドーマの作製に根ざしている。ハイブリドーマ作成には、目的の抗原に特異的な抗体を産生する抗原特異的血漿/形質芽細胞（ASPC）を特定し、これらの細胞と骨髄腫細胞を融合させることが含まれる。ウサギのB細胞を使って、ウサギ・ハイブリドーマ（英語版）を形成することができる。隣接する細胞膜を融合させるためにポリエチレングリコールを用いるが成功率が低いため、融合細胞のみが増殖できる選択培地を使用する。これが可能なのは、骨髄腫細胞が、核酸のサルベージ合成に必要な酵素であるヒポキサンチン-グアニン-ホスホリボシルトランスフェラーゼ（HGPRT）を合成する能力を失っているためである。HGPRTが欠損していても、de novoプリン合成経路（英語版）が破壊されない限り、これらの細胞にとっては問題にならない。細胞をアミノプテリン（英語版）（葉酸類似物質で、ジヒドロ葉酸還元酵素（DHFR）を阻害する）にさらすと、細胞は de novo 経路を使用できなくなり、核酸に対して完全な栄養要求性になるため、生き延びるために補給が必要となる。 選択培地は、ヒポキサンチン、アミノプテリン、チミジンを含むため、HAT培地（英語版）と呼ばれている。この培地は、融合細胞（ハイブリドーマ）に選択的である。未融合の骨髄腫細胞は、HGPRTが欠損しているため、DNAを複製することができず、増殖できない。未融合の脾臓細胞は、その寿命が限られているため、無制限に増殖することはできない。ハイブリドーマと呼ばれる融合したハイブリッド細胞のみが、培地中で無制限に増殖することができる。その理由は、脾臓細胞パートナーがHGPRTを供給し、骨髄腫細胞パートナーがそれを不死にする特性（癌細胞に似ている）を持つためである。 次に、この細胞の混合物を希釈し、マイクロタイターウェル上で単一の親細胞からクローンを増殖させる。その後、異なるクローンによって分泌された抗体は、抗原に結合する能力（ELISAや抗原マイクロアレイアッセイなどの試験で）や、またはイムノドットブロットで評価される。そして、最も生産的で安定したクローンが将来の使用のために選択される。 このハイブリドーマは、適切な細胞培養培地で無制限に増殖させることができる。それらはまた、マウスに注射することもできる（腸を囲む腹膜腔内）。そこで腹水と呼ばれる抗体を多く含む液体を分泌する腫瘍を生成する。 ハイブリドーマの増殖をさらに促進するために、器内（in vitro）での選択の際に培地を濃縮しなければならない。これは、フィーダー繊維細胞の層や、ブライクローンなどの補助媒体を使用することで実施される。マクロファージで調整した培地を使用することができる。腹水手法は動物に苦痛を与えるため、通常は細胞培養での製造が望ましい。代替技術が存在する場合、腹水は非倫理的と見なされる。
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