諸条件

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諸条件

出典: フリー百科事典『ウィキペディア（Wikipedia）』 (2011/11/12 10:38 UTC 版)

「エタノール沈殿」の記事における「諸条件」の解説

核酸のエタノール沈殿は極めて一般的な手法であるが、実施上の細かな条件は多様なものが用いられている。 温度 沈殿を生成させる温度は常温から-80°C程度まで様々で行われている。低温であるほど沈殿が得やすいと考えられているが、一般には氷温でも充分定量的に回収できる。 塩 上述の通り塩析効果が期待できればどのような塩でも構わないが、共在する化合物や引き続き行う実験の種類によっては不適切になる場合も考えられる。例えば溶液中にSDSが存在する場合、カリウムイオンによって不溶性沈殿が生じるためカリウム塩は避ける必要がある。一般によく用いられているのは以下の4種類であり、特に酢酸ナトリウムは頻用される。酢酸ナトリウム 一般的に用いられる塩である。 酢酸アンモニウム デオキシリボヌクレオシド三リン酸の溶解度が高いため、これを除く目的で用いられる。アンモニウムイオンにより阻害される酵素（DNAリガーゼ・リン酸化酵素・ある種の制限酵素など）があるので注意が必要である。 塩化リチウム エタノール水溶液への溶解度が高いため、RNAの濃縮など高濃度のエタノールで沈殿を得たい場合に用いられる。塩化物イオンにより阻害される酵素（RNAポリメラーゼ・逆転写酵素など）があるので注意が必要である。 塩化ナトリウム 溶液中のSDSを除く目的で用いられる。 遠心条件 共沈剤を使わない場合でも、氷温・12000×g・15分間の遠心分離で20ng程度のDNAを定量的に回収することができる。しかしごく微量である場合や、100塩基に満たない短い核酸断片である場合は、より強い条件で長い時間の遠心分離が必要になる。