直接吸着法
出典: フリー百科事典『ウィキペディア（Wikipedia）』 (2022/03/30 07:27 UTC 版)
「ELISA (分析法)」の記事における「直接吸着法」の解説
試料溶液を固相（プラスチックチューブ、マイクロプレート、ガラスビーズなど）に接触させて吸着させる。 抗原抗体反応および酵素反応に関与しないタンパク質（スキムミルク、アルブミンなど）を固相に吸着させる（ブロッキング）。 目的のタンパク質に特異的な抗体を固相に接触させて、抗原抗体反応を起こさせる。 反応しなかった余分な抗体を洗い流す。 3.のステップで加えた抗体に酵素が標識していない場合は、3.の抗体（一次抗体）と特異的に反応する抗体（酵素標識済み、二次抗体）を作用させる。その後、余分な二次抗体を洗い流す。 酵素の基質（通常、発色あるいは発光試薬）を加え、酵素反応の生成物を検出する。 この方法は簡便であるが、最初のステップにおいて目的タンパク質以外のタンパク質が多量に存在する場合は、それらのタンパク質の影響を受けてしまうため、定量性が悪くなる。また、タンパク質によっては微量な領域での吸着が定量的でなくなるなど、タンパク質の量および性質により定量性が悪くなる欠点を持っている。
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