タンパク質の定量法

分子生物学用語集

タンパク質の定量法

タンパク質の定量法には、大きくわけて二つの方法がある。

1. 分光的(spectrophotometric)な方法 - 近紫外の吸収を測定する方法
2. 比色法(colorimetric) - 呈色させた試料と標準溶液¹⁾の比較から定量する方法

方法によって特長や検出感度が異なる。

	方法	測定波長	検出感度
近紫外吸収	分光	280 nm	20-3000 µg
Lowry法	比色	770 nm	5-100 µg
近紫外吸収	分光	205 nm	1-100 µg
Bradford法	比色	595 nm	1-50 µg
BCA法2)	比色	562 nm	0.2-50µg

分光法による定量

紫外領域における吸光度の測定によってタンパク質を定量する。280nmにおける主な吸収はチロシンである。

タンパク質の吸光係数

ε_280nm (M^-1cm^-1) = 5500N_Tyr+1490N_Trp+125N_Cys

[protein] = A_280nm x ε_280nm M^-1

N_Tyr,N_Trp,N_Cys:各アミノ酸の数

比色法による定量

(Colorimetric protein assay)

References

• 分光法
  • Spectrophotometric determination of protein concentration.
    Grimsley GR, Pace CN
    Curr Protoc Protein SciChapter 3pUnit 3.1(2004 Nov)
  • How to measure and predict the molar absorption coefficient of a protein.
    Pace CN, Vajdos F, Fee L, Grimsley G, Gray T
    Protein Sci4p2411-23(1995 Nov)
• 比色法
  • Quantitation of protein.
    Noble JE, Bailey MJ
    Methods Enzymol463p73-95(2009)
  • Spectrophotometric and colorimetric determination of protein concentration.
    Simonian MH, Smith JA
    Curr Protoc Mol BiolChapter 10pUnit 10.1A(2006 Nov)
  • Colorimetric protein assay techniques.
    Sapan CV, Lundblad RL, Price NC
    Biotechnol Appl Biochem29 ( Pt 2)p99-108(1999 Apr)

Link

• Quantification of Protein

¹⁾ BSAやカゼインなど

²⁾ ビウレット反応の応用

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