生物学用語辞典 |
DNA増幅
英訳・(英)同義/類義語:DNA amplification, DNA amplification, PCR, Polymerase chain reaction (PCR)
DNA分子の特定の領域または全体を、さまざまなDNAポリメラーゼを利用して量的に増幅する実験手法。耐熱性酵素とプライマーを用いるポリメラーゼ連鎖反応(PCR)や、ローリングサークル型のDNA合成を利用する方法などが開発され、使われている。
PCR法
英訳・(英)同義/類義語:polymerase chain reaction, , PCR , PCR, PCR method, , polymerase chain reaction, PCR
DNAポリメラーゼを利用してDNA分子の特定の領域を増幅させる実験手法で、目標領域の両端に相補的な20塩基程度のオリゴヌクレオチド、基質dNTP、鋳型となるDNA、耐熱性DNAポリメラーゼのを含む反応液を、高温での熱変成、低温でのプライマーと鋳型DNAとの特異的結合、プライマーからのDNA合成、さらに熱変成の各段階を数十回繰り返すことで幾何級数的にプライマーの組を両端に持つDNA断片が増幅される。80年代に開発された代表的な技術で、遺伝子組み換実験の基礎技術での一つであることから、開発者がノーベル賞を受賞した。
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PCR法 ( Polymerase Chain Reaction )
エイズ関連用語集 |
PCR法
【概要】 ノーベル賞をとった核酸増幅法の一つ。最初に検体からDNAを抽出する。これをDNA分解酵素で断片化したあと、高温にして1本鎖にし、次に目的遺伝子に特有のプローブ(短い遺伝子)と塩基を加え、DNAポリメラーゼを反応させる。そうすると相補性のDNA鎖が合成され2本鎖の割り箸のようなDNAができる。試験管を高温にすると割り箸が割れるようにDNAは1本鎖に別れる。温度を下げるとまたプローブとの反応が進む。これを繰り返すと1本の遺伝子断片が、2本、4本、8本、16本、、と倍々で増えて行く。数十回繰り返すと、元の遺伝子が数十万倍に増える。あらかじめ量がわかった遺伝子を入れて並行して反応させれば、測定検体と比較して定量できる。
【問題点】 感度の高さが逆に弱点になる。つまり実験環境から間違った遺伝子が潜り込むことがある。また拾い上げるべき遺伝子の配列(プライマー)の設計がポイントになる。目的遺伝子の変異が激しい場合は、複数のプライマーを組み合わせて見逃しを避けなければならない。
【応用】 ロシュ社ではクラミジアトラコマチス、淋菌、結核菌、Mアビウム、Mイントラセルラーの診断キットを市販しており、ウイルスではHBV、HCV、HIV-1の定量測定キットを市販している。HIV感染症における応用としては、(1)HIV抗体ができる前の、急性HIV感染症の診断、(2)感染母体からの移行抗体をもつ胎児・新生児のHIV感染の診断がある。細胞からDNAを抽出する場合はプロウイルスを検出できる。
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ポリメラーゼ連鎖反応
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PCR法
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PCR法
【英】:Polymerase Chain Reaction
ポリメラーゼ連鎖反応。試験管内で特定のDNA 断片を酵素反応によって化学的に合成・増幅する方法。伝染病の病原体の遺伝子検出法として診断に利用される。合成DNAを反応開始のためのプライマーとして用意し、その塩基配列に従って合成される病原体特有のDNA増幅を行い、増幅産物を特定することによって病原体の存在を定性的、かつ定量的に調べることができる。RNA遺伝子を持つ病原体の遺伝子を検出する場合は、逆転写酵素反応によりRNAに対応するcDNAを増幅するので、これはRT-PCR(Reverse Transcription PCR)と呼ばれる。感染性の病原体遺伝子を合成・増殖させるわけではないため、特別な微生物検査施設を必要としない。僅かの遺伝子でも検出可能な感度に優れた迅速診断法として注目されているが、非特異反応の出現や反応阻害因子の作用による誤判定に注意が必要。
ウィキペディア |
ポリメラーゼ連鎖反応
出典: フリー百科事典『ウィキペディア(Wikipedia)』 (2011/12/13 02:41 UTC 版)
(polymerase chain reaction から転送)
ポリメラーゼ連鎖反応(ポリメラーゼれんさはんのう、polymerase chain reaction, PCR)は、DNAを増幅するための原理またはそれを用いた手法で、手法を指す場合はPCR法と呼ばれることの方が多い。英語をそのまま片仮名読みにしたポリメラーゼチェーンリアクションとも呼ばれる。次の特徴を持つ。
- ヒトのゲノム(30億塩基対)のような非常に長大なDNA分子の中から、自分の望んだ特定のDNA断片(数百から数千塩基対)だけを選択的に増幅させることができる。しかも極めて微量なDNA溶液で目的を達成できる。
- 増幅に要する時間が2時間程度と短い。
- プロセスが単純で、全自動の卓上用装置で増幅できる。
PCR法そのものや派生した逆転写ポリメラーゼ連鎖反応、リアルタイムPCRやDNAシークエンシング等の様々な技術は、分子遺伝学の研究のみならず、生理学・分類学などの研究にも広く応用されている。また、微量のゲノムやRNAから目的のDNAを選択的に増幅できることから、DNA型鑑定や診断等にも応用されている。
- ^ Saiki, R. K.; Scharf, S.; Faloona, F.; Mullis, K. B.; Horn, G. T.; Erlich, H. A.; Arnheim, N. (1985). "Enzymatic amplification of beta-globin genomic sequences and restriction site analysis for diagnosis of sickle cell anemia." Science 230 (4732): 1350–1354. PMID 2999980.
- ^ Saiki, R. K.; Gelfand, D. H.; Stoffel, S.; Scharf, S. J.; Higuchi, R.; Horn, G. T.; Mullis, K. B.; Erlich, H. A. (1988). "Primer-directed enzymatic amplification of DNA with a thermostable DNA polymerase." Science 239 (4839): 487–491. PMID 2448875.
- 1 ポリメラーゼ連鎖反応とは
- 2 ポリメラーゼ連鎖反応の概要
- 3 関連項目
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